一、CSDS模型研究背景

CSDS的全称是chronic social defeated stress，又称慢性社会挫败应激模型，是一种用来制作动物抑郁模型的方法。在神经精神病学研究领域中，引起人们极大兴趣的是开发有效的抑郁症动物模型，以帮助理解抑郁症背后的神经生物学和分子机制。慢性应激的各种模型已被用于在小鼠中诱发与抑郁相关的症状，其中包括慢性不可预测的应激，足部震颤，固定应激，然后进行性yu减退或类似绝望行为的测量（例如，蔗糖偏爱测试，强迫游泳测试和尾巴悬吊测试），但它们并未很好地验证为人类抑郁症的模型。

当前，慢性社交挫败压力由于其可靠性和可重复性而被广泛接受为抑郁症的有效模型。由于以下原因，社交失败范例已被证明是人类抑郁的良好模型：

1）易感小鼠的抑郁表型（社交回避，快感不足，代谢变化等）。可以通过抗抑郁药的长期治liao来逆转，但不能通过急性给药来逆转。

2）社会挫败压力会产生易感表型和适应性表型，这可用来解释抑郁症病理生理学中人类压力敏感性的个体差异。

3）社交失败压力诱发的易感表型在大脑奖励电路中伴随遗传和表观遗传变化而持久。

二、设备及软件（建议）

1. 透明的鼠笼（带衬垫的一次性鼠笼）
   

2. 标准水瓶（鼠标水瓶）
   

3. 带吸管的水瓶塞（氯丁橡胶塞，1英寸弯曲管–尖头）
   

4. 气缸（定制，用于额外注水的塑料支架）
   

5. 分压器（定制，透明的多孔有机玻璃板）
   

6. 可移动外壳（定制，透明有机玻璃，顶部和底部打开）
   

7. 秒表

8. 开场实验箱（定制，44 [w] x 44 [d] x 30 [h] cm）
   

9. 用于社交互动测试的视频跟踪系统（例如，上海欣软，VisuTrack动物行为分析软件，CCD摄像头和计算机）

   

   
   

三、 慢性社交挫败应激模型的建立

（1）传统 CSDS 建模方法

该部分实验内容是参照了有关文献：Kudryavtseva NN，Bakshtanovskaya IV，Koryakina LA. Socialmodel of depression in mice of C57BL/6J strain［J］. Pharmacol Biochem Behav，1991，38（2）：315-320.

首先根据需要选取一定数量的CD 1小鼠作为攻击性小鼠，在正式实验前2-3周开始对其攻击性进行筛选。具体方法就是:每个饲养笼中饲养雄性和雌性两只周龄相近的CD1小鼠，一定时间内让CD1雄性小鼠产生领地意识；1周以后，将配对饲养的雌鼠分离出饲养笼，随机放入一只陌生的C57小鼠作为领地入侵者，如果CD1雄性小鼠在1 min之内就开始对C57小鼠发动攻击，那么该CD1小鼠则被视为攻击性CD1小鼠。运用同样的方法筛选出所有需要的攻击性雄性CD1小鼠。正式实验前，选取雄性C57小鼠(7周)，随机分配成正常组和应激组，每组10只，对照组每2只一笼，其余均单笼饲养，给正常饮食饮水一周充分适应环境。当实验开始时，提前分离CD1雌鼠，取模型组C57小鼠一只，直接放入陌生雄性CD1小鼠（8-9周）饲养笼中，使C57小鼠遭受雄性CD1小鼠持续性攻击约5-10 min;然后将两只小鼠用带有密集小孔的透明塑料隔板隔开，使两只小鼠彼此仍能互视和闻嗅但是无法接触，运用这种方法持续到下次进行攻击前为止，完成该过程后即为第1天应激。第2天再将该C57鼠放入另一不同的CD1雄性鼠的笼中，使C57小鼠受到相同程度的应激;第三天再放入第三只CD1雄性鼠的笼中，同样使C57小鼠受到同样程度的应激。如此连续应激10天，并保证每tian同一只C57小鼠受到不同CD1雄性鼠的攻击。在此期间，对照组和应激组C57小鼠均维持正常饮食饮水，而对照组则保持2只一笼，每tian相互更换接触不同的小鼠。

（2）改进型慢性社交挫败应激（CSDS）

模型的建立CSDS模型的构建方法参照文献：Golden SA，Covington HE 3rd，Berton O，et al. A standardizedprotocol for repeated social defeat stress in mice［J］. Nat Protoc，2011，6（8）：1183-1191.

将CD­1小鼠单笼饲养 7 d 产生领地意识，C57BL/6 小鼠 4~5只饲养 7 d 适应环境。首先筛选 CD­1 小鼠的攻击性，将C57BL/6小鼠置CD­1小鼠笼中3 min，若CD­1小鼠发起攻击多于 5 次且攻击潜伏期< 1 min，认为有攻击性，在 3 d 中至少 2 次有攻击性，可作为模型中的攻击鼠。实验组（Sus）小鼠进行 10 d 的 CSDS，即将实验组 C57BL/6 小鼠连续 10 d 放入 CD­1 小鼠笼中，被攻击 5~10 min后用一带孔透明亚克力板隔离24 h，每tian更换新的CD­1小鼠避免适应。10 d后将实验组C57BL/6小鼠取出并单笼饲养。而非应激对照组（Con）为同周龄C57BL/6小鼠，每tian与无攻击性 C57BL/6 小鼠接触 5~10 min 后用相同的板隔离24 h，每tian更换新的C57BL/6小鼠。10 d结束后将非应激对照组C57BL/6小鼠取出并单笼饲养。

四、CSDS模型的检测方法

10天连续应激结束后即开始行为学测试。根据糖水消耗，社会接触的行为学和悬尾测试的结果将C57小鼠分为正常组，抑郁敏感组，抑郁非敏感组。

（1）糖水偏好实验

糖水偏好测试是检测抑郁症快感缺失的经典方法。根据文献稍做修改。首先给予小鼠两瓶清水，24 h后将其中一瓶换成1%蔗糖溶液，称重并记录两瓶质量，12 h后交换瓶的位置避免方向偏好，经过 24 h 测试后再次称重，糖水偏好系数为：糖水消耗质量/总消耗质量。

参考文献：Liu MY，Yin CY，Zhu LJ，et al. Sucrose preference test for measurement of stress ­induced anhedonia in mice［J］. Nat Protoc，2018，13（7）：1686-1698.

测试前用自来水配制好1%蔗糖水，与不含蔗糖的正常自来水同时放在C57模型鼠的鼠笼处，保证其自由饮用，同时提供充足的鼠食，每12h将糖水和白水互换位置，以防止C57模型鼠产生位置偏好。到第三天将所有的水和食物同时撤走，将C57模型鼠禁食24 h。禁食结束后分别称量糖水和白水的重量并记录，然后将两瓶水随机放在饲养笼上供模型鼠自由饮用，1h后取下两瓶水分别测量两瓶水剩下的重量，计算出糖水消耗重量A和白水消耗重量B，利用公式A/（A+B）X 100%即得到CSDS模型鼠的糖水偏好率。糖水偏好率的值与动物的快感程度呈正相关，其值越小则表明动物快感缺失越严重。