朱砂an神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆的 影响及作用机制研究

方法:

第1部分:朱砂an神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆的影响

  • 朱砂an神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响

条件性恐惧模型的复制:将实验动物随机分为空白对照组、模型对照组、给 药组,每组10只。给药组实验动物给予朱砂an神丸混悬液(经灌胃途径给予,

  • 81mg/g),空白对照组、模型对照组均给予相同体积的双蒸水,1次/曰,连续 7日。在末次给药后,将模型对照组、给药组实验动物依次放入条件性恐惧刺激 箱内,适应120秒。在第120秒给予实验动物单一频率声音信号(2000Hz,75dB)。第125秒,在声音信号的基础上给予实验动物持续5秒的不可逃避的足底电刺激 (0.75mA)第130秒声音信号与电刺激同时结束,130〜190秒内不做任何处理。 第190秒重复120〜190秒过程,连续20次。空白对照组仅给予声音信号不给予 电刺激,其他操作相同。结束后让实验动物在刺激箱内停留120秒后再放回饲养 笼。

恐惧记忆习得测试:复制条件性恐惧模型的次日,将各组实验动物依次再放 入刺激箱内,适应120秒。在第120秒给予实验动物单一频率声音信号(2000Hz, 75dB)。第130秒声音信号结束,130〜190秒内不做任何处理,记录声音信号停 止后60秒内实验动物的值直反应时间。第190秒重复12CM90秒过程,连续5 次。结束后让实验动物在刺激箱内停留120秒后再放回饲养笼。记录各组实验动 物的僵直反应时间,以此作为观测指标探究朱砂an神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记 忆习得的影响。

  • 朱砂an神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆消退的影响

按上述“朱砂an神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响”实验方法进行

条件性恐惧模型的复制,在习得测试后的第1、3、5、7天,将各组实验动物依 次再放入刺激箱内,重复恐惧记忆习得测试的操作,记录各组实验动物的僵直反 应时间,以此作为观测指标探宂朱砂an神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆消退的影 响。

  • 朱砂an神丸对条件性恐惧大鼠自主活动的影响

按上述“朱砂an神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响”实验方法进行

条件性恐惧模型的复制,在各组实验动物进行条件性恐惧模型复制的次日,将各 组实验动物放入大小鼠开场活动实验箱内,记录各组实验动物运动时间、运动距 离,以此探究朱砂an神丸对条件性恐惧大鼠自主活动的影响。

 

实验仪器

条件性恐惧实验监测系统(亚搏APP·官方网站(中国)v2.78IOS下载/Android通用版/手机APP,型号XR-XC404-2), 条件性恐惧刺激箱包含隔音箱和刺激箱,隔音箱为670x650x700mm的斯金纳箱, 可接入摄像头、蜂鸣器、喇叭刺激器等模块。实验箱尺寸为300x300x400mm的 亚克力箱,前后壁透明,左右壁黑白相间,箱子底部为(p4mm不锈钢棒,轴间距 为16mm的不锈钢棒,可通0〜5mA恒定电流;

条件性恐惧实验分析系统亚搏APP·官方网站(中国)v2.78IOS下载/Android通用版/手机APP,型号:SuperFcs)

实验结果表明:模型对照组实验动物PS幅值变化率显著高于空白对照组, LTP出现异常的增强。这种突触功能可塑性的改变可能与条件性恐惧刺激过程 中,海马出现应激损伤有关。而给药组实验动物的PS幅值变化率显著低于模型 对照组,与空白对照组更为接近。说明朱砂an神丸能够下调海马异常增强的LTP 7]C平,从而恢复了海马LTP/LTD的正常调节。

LTPLTD的诱导都依赖于NMDA受体,而受体激活后产生的是LTP还 是LTD与突触后膜Ca浓度升高的水平有关。Ca2+浓度迅速的大幅度增加将诱 导LTP而适当程度的増加会诱导LTD正常情况下NMDAGlu结合后将突触 前膜的电信号转化成突触后膜的Ca2+信号,使突触后膜的Ca2+浓度升高,大量 的Ca2M乍为**信使,可进一步激活生化级联反应,从而改变突触可塑性,产生 LTPLTP产生后,突触后膜的一些信使分子作用于突触前膜,增强Glu的释 放,维持LTP但是,慢性应激增加海马内Glu含量,GluNMDA受体结合, 激活NMDA受体门控的Ca2+通道,引起Ca2+过度内流,增强了 LTPLTD受 到抑制,结果导致新的记忆不能与已有记忆整合,这可能是恐惧记忆难以消退的 机制之一。

综上所述,本实验确定了朱砂an神丸具有促进恐惧记忆消退的作用,其作用 机理可能是与其保护海马神经元,增强海马突触结构与功能可塑性相关。对于朱 砂an神丸是否能够加强LTD促进新记忆写入己有记忆框架,需要通过测定给 药后实验动物LTD的情况进行实验研究来验证此假说。对于朱砂an神丸具体改 变海马区哪些相关蛋白的表达也有待进一步研究证实。


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