摘要目的: 考察补阴消郁汤配方颗粒对更年期模型小鼠抑郁行为的保护作用，并考察其可能的机制。方法: 通过卵巢摘除建立更年期模型，补阴消郁汤配方颗粒2g /kg、6g /kg、18g /kg 连续给药4 周，通过小鼠旷场实验、糖水消耗实验、悬尾实验和强迫游泳实验观察小鼠抑郁行为，高效液相色谱法测定小鼠前额叶皮层单胺类神经递质的水平。结果: 行为学检测结果显示补阴消郁汤配方颗粒6g /kg、18g /kg 剂量组能明显改善更年期抑郁模型小鼠行为，明显增加小鼠在旷场中央站立次数以及糖水消耗量，并且显著减少小鼠悬尾不动时间和游泳不动时间。脑内单胺类神经递质检测结果显示，补阴消郁汤配方颗粒18g /kg 剂量组能明显增加5-HT 和DA 含量。

结论: 补阴消郁汤配方颗粒预防给药可以改善更年期模型小鼠的抑郁行为，其机制可能与调节小鼠脑内单胺类神经递质的含量有关。

关键词补阴消郁汤; 更年期抑郁; 行为学; 单胺类神经递质

抑郁症作为一种慢性**已经影响了上百万人的正常生活，并且对抑郁症患者家庭造成巨大的经济负担［1］。抑郁症在更年期女性人群中发生率高，其发生率可达20%，严重影响更年期女性的社会行为，并且处于更年期时期的女性抑郁和**倾向的行为发生率均明显高于同龄男性。抑郁症发病机制复杂，其确切的发病机制目前还未明确，有研究认为单胺类神经递质对抑郁症的发生起着至关重要的作用，且这一观点在抗抑郁的**中得到了验证。目前临床上的抗抑郁**一般为影响单胺类神经递质的**，虽然这些**有一定的**作用，但大多起效较慢，同时存在明显的**反应。因此开发更**、有效的中药**已经成为一种临床**抑郁症的有效途径。

二至丸是根据节气命名的典型方剂，需要用冬至采收的女贞子、夏至采收的旱莲草加工而成，故名" 二至丸" ，具有滋阴凉血、补益肝肾之功。综合考虑在传统二至丸中加味加入栀子、黄芩、甘草改方名为补阴消郁汤，目前，补阴消郁汤对更年期抑郁小鼠的**作用还未有报道，本文研究补阴消郁汤配方颗粒对更年期抑郁小鼠模型的**作用，并观察补阴消郁汤配方颗粒对小鼠脑内单胺类神经递质水平的影响。

1 材料和方法

1． 1 试验**补阴消郁汤配方颗粒: 每剂含量: 旱莲草( 1507001W) 20 g，女贞子( 1510003Y) 20 g，栀子( 1508001S) 10g，黄岑( 1506001W) 10 g，甘草( 1506001S) 5 g。全部**均由华润三九医药股份有限公司生产。给药前，将一剂补阴消郁汤配方颗粒加入32． 5 ml 煮沸的蒸馏水溶解，配制成2 g /ml 的母液备用。

氟西汀: 百忧解，PATHEON FＲANCE( 法国) 公司生产，礼来苏州制药有限公司分装，批号: 5197AA。1． 2 动物SPF 级雌性昆明小鼠70 只，体质量18 ～ 22g，动物合格证号: SCXK( 渝) 2012-2015，饲养与SPF 级实验室，室内环境温度控制在25 ± 2 ℃，相对湿度为40% ～ 70%，光照时间为12h /12h 明暗交替。实验期间动物自由摄食饮水。1． 3 试剂5-HT 标准品、DA 标准品、2，4-二硝基氟苯( DNFB)均购于Sigma-Aldrich 公司。

1． 4 仪器XＲ-XZ301 旷场实验装置，XＲ-XX203 悬尾试验观察箱，XＲ-XQ202 小鼠泳池，XＲ-Xmaze-1 动物行为分析系统( 亚搏APP·官方网站（中国）v2.78IOS下载/Android通用版/手机APP) ; Agilent 高效液相色谱仪( 包括自动进样器、UV 检测器和色谱数据处理系统) ，Hypersil ODS2 填料色谱柱( 大连伊利特分析仪器有限公司) 。1． 5 方法小鼠适应喂养7d 后随机选取50 只小鼠将进行双侧卵巢手术摘除。卵巢摘除手术: 10% 水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠( 4ml /kg) ，于俯卧位固定，用酒精棉球擦拭**背部皮肤，在小鼠大腿根部稍上方水平，脊柱旁约1 cm 处用剪刀剪开一个与脊柱呈平行状态的长5 mm 左右的切口，剥离黏膜及下方腰肌，剥离包绕卵巢的脂肪组织，将粉红色的卵巢轻轻拉出切口，在卵巢两侧结扎并小心摘除卵巢，缝合皮下及皮肤层关闭腹腔。随机选取10 只小鼠作为假手术组，假手术组不切除卵巢，仅打开腹腔后，摘取少许脂肪组织后关闭腹腔。

70 只小鼠随机分为7 组，分别为空白对照组、假手术对照组、模型组、补阴消郁汤配方颗粒2 g /kg、6 g /kg、18 g /kg 剂量组和氟西汀0． 018 g /kg 剂量组。其中空白对照组小鼠不做任何处理，假手术对照组小鼠进行假手术操作，其余小鼠进行双侧卵巢摘除手术。所有小鼠于手术1 周后开始给药，给药组均按相应的给药剂量进行灌胃给药，体积为0． 2 ml /10g，空白对照组、假手术组和模型对照组采用相同的给**法，分别给予相同体积的对照溶剂。每日灌胃给药，连续给药4 周。

1． 5． 1 小鼠外貌评分的标准外貌打分实验用来检测动物日常的修饰行为，实验方法参考已发表的文献的方法。具体方法如下: 选取小鼠头部、颈部、背部、尾部、爪子5 个部位作为检测部位，每隔3 天观测以上5 个部位同一区域的的毛发梳理情况。毛发呈现正常状态、顺滑有光泽、未出现恶化的物理状态则评为0 分，毛发出现异常的状态( 如粘有粪便、分泌物等) 、杂乱无光泽、出现恶化的物理状态( 如脱落、打节) 则评分为1 分，每只小鼠的日常修饰行为用以上5 个部位的评分之和进行评估。1． 5． 2 自主活动实验分别于给药前、给药2 周后和给药4 周后进行小鼠自主活动实验。将小鼠置于正方形开放视野实验箱内，实验箱尺寸为80 cm × 80 cm × 75 cm( 长宽高) ，底板用笔画成10 cm × 10 cm 的方格。室内隔音，用视频采集记录系统记录小鼠活动行为，每只小鼠测试时间15 min，测试完成后用动物行为分析系统进行测试结果分析。

1． 5． 3 旷场实验分别于给药前、给药2 周后和给药4 周后进行小鼠旷场实验。将小鼠从笼内取出，放置于旷场实验装置的中央，并迅速关闭上盖( 应避免产生声响影响小鼠) ，打开录像记录系统，并记录小鼠5 min 内在旷场内的活动，包括小鼠在旷场中心活动时间，直立次数( 前肢离地1cm 以上) 。实验应在黑暗的环境内进行，装置上方约1 m 处放置60w 灯泡，避免在装置内产生阴影。每只小鼠实验后用酒精清洁装置，以消除留下

的气味。

1． 5． 4 糖水消耗实验分别于给药前、给药2 周后和给药4 周后进行小鼠糖水消耗实验。小鼠禁食禁水18 h 后，每只小鼠单笼饲养并给予2 个喂水瓶，每瓶装入100 ml 饮水，1瓶内装1%蔗糖水，1瓶内装白水。实验于晚8 点开始，到**天早8 点结束。实验结束后记录各瓶中剩余水量，计算出小鼠消耗糖水占总消耗水量的百分比即糖水偏好。

1． 5． 5 悬尾实验小鼠倒挂于悬尾支架上时，小鼠头部会上下左右活动，寻找可以攀爬的地方，经过一段时间后会因失望而导致活动次数减少，出现间断性不动现象。小鼠于末次给药1 小时后进行悬尾实验。将小鼠尾末端2 cm 处用透明胶带固定于悬尾箱的金属棒上，使小鼠呈倒挂悬空状，头部离箱底50cm。小鼠倒挂6 min，开始2 min 为适应时间，记录后4 min 内小鼠不动时间。

1． 5． 6 强迫游泳实验小鼠放进圆桶中后会出现挣扎试图攀爬的行为，开始时，会尽力游泳试图逃脱，但随着未能逃脱，很快转变为漂浮不动状态，仅露出鼻孔保持呼吸，四肢偶尔划动水面，以保持身体呈漂浮状态，这种情形是动物放弃逃脱的希望的表现，属于行为上的绝望。小鼠于末次给药后1 h，将小鼠放置于水温( 25 ± 1) ℃、水深15 cm 的圆桶内游泳，连续游泳6min，开始2 min 为适应时间，记录后4 min 内小鼠累计不动时间。

1． 5． 7强迫游泳实验小鼠放进圆桶中后会出现挣扎试图攀爬的行为，开始时，会尽力游泳试图逃脱，但随着未能逃脱，很快转变为漂浮不动状态，仅露出鼻孔保持呼吸，四肢偶尔划动水面，以保持身体呈漂浮状态，这种情形是动物放弃逃脱的希望的表现，属于行为上的绝望。小鼠于末次给药后1 h，将小鼠放置于水温( 25 ± 1) ℃、水深15 cm 的圆桶内游泳，连续游泳6min，开始2 min 为适应时间，记录后4 min 内小鼠累计不动时间。

1． 5． 7 小鼠脑区单胺类神经递质的含量测定行为学实验结束后小鼠取脑，分离前额叶皮层和海马，称重。组织按照1g: 7．5 ml 比例加入组织裂解液，冰浴上超声匀浆破碎。4℃ 离心15min，取上清液加入等体积的高氯酸沉淀剂。冰上静置10min，4℃离心15min，取上清液，于滤膜过滤后备用。进样量为10 ul，流速为1． 0 ml /min，发射波长为330 nm，激发波长为280 nm。分别检测前额叶皮层和海马内5-HT 和多巴胺含量。

2 结果

2． 1 补阴消郁汤配方颗粒对卵巢摘除抑郁模型小鼠体重增长的影响各组小鼠体重在给药前没有显著性差异，给药后，模型组小鼠与空白组相比，在给药2 周后和给药4 周后小鼠体重增长值均明显减少; 假手术组小鼠体重增长值在给药2 周和4周后与空白对照组相比均无明显差异。补阴消郁汤6 g /kg 剂量组、18 g /kg 剂量组和氟西汀0． 018 g /kg 给药组在给药4 周后体重增长值与模型组相比明显增加，如表1 所示。

2． 2 补阴消郁汤配方颗粒对卵巢摘除抑郁模型小鼠外貌评分的影响小鼠外貌评分结果见表2，给药前各给药组外貌评分与模型组相比均无明显差异。模型组小鼠与空白组相比，在给药2 周后和给药4 周后小鼠外貌评分均明显增加; 假手术组小鼠外貌评分在给药前、给药2 周和4 周后与空白对照组相比均无明显差异。补阴消郁汤6， 18 g /kg 剂量组和氟西汀0． 018 g /kg 给药组在给药2 周后和4 周后外貌评分与模型组相比明显减少。

2． 3 补阴消郁汤对卵巢摘除抑郁模型小鼠旷场实验中站立次数的影响小鼠旷场实验结果见表3，给药前各给药组小鼠在旷场装置中心区域停留的时间与模型组相比均无明显差异。模型组小鼠在给药前、给药2 周后和给药4 周后在旷场装置中心区域停留的时间明显少于空白对照组; 假手术组小鼠在旷场装置中心区域停留的时间在给药前、给药2 周和4 周后与空白对照组相比均无明显差异。补阴消郁汤6， 18 g /kg 剂量组和氟西汀0． 018 g /kg 给药组小鼠在给药2 周后和给药4 周后在旷场装置中心区域停留的时间较模型组明显延长。

2． 4 补阴消郁汤对卵巢摘除抑郁模型小鼠糖水消耗量的影响糖水消耗实验结果见表4，给药前各给药组小鼠糖水消耗量与模型组相比均无明显差异。模型组小鼠在给药前、给药2 周后和给药4 周后糖水消耗量均明显少于空白对照组; 假手术组小鼠糖水消耗量在给药前、给药2 周和4 周后与空白对照组相比均无明显差异。补阴消郁汤6，18 g /kg 剂量组和氟西汀0．018 g /kg 给药组小鼠在给药2 周后和给药4 周后糖水消耗量较模型组明显增加。

2． 5 补阴消郁汤对卵巢摘除抑郁模型行为绝望实验中不动时间的影响小鼠悬尾实验和强迫游泳实验结果见表5，给药前各给药组小鼠悬尾不动时间和游泳不动时间与模型组相比均无明显差异。模型组小鼠悬尾不动时间和游泳不动时间与空白对照组相比均明显延长; 假手术组小鼠悬尾不动时间和游泳不动时间与空白对照组均无明显差异。补阴消郁汤6， 18 g /kg剂量组和氟西汀0． 018 g /kg 给药组小鼠在给药2 周后和给药4周后悬尾不动时间和游泳不动时间较模型组明显缩短。

2． 6 补阴消郁汤对卵巢摘除抑郁模型小鼠脑内单胺类神经递

质含量的影响小鼠海马及前额叶皮层内5-HT 和多巴胺含量检测结果见表6，结果显示模型组小鼠海马及前额叶皮层内5-HT 和DA 含量均明显低于空白对照组; 而假手术组小鼠海马及前额叶皮层内5-HT 和DA 含量与空白对照组相比均无明显差异。补阴消郁汤18 g /kg 剂量组和氟西汀0． 018 g /kg 给药组小鼠海马及前额叶皮层内5-HT 和DA 含量均明显高于模型组。

3 讨论

更年期是女性抑郁的高发时期，一般认为是由于女性卵巢功能逐渐衰退诱发抑郁，因此本研究采用摘除卵巢小鼠建立小观察到体重和自我修饰行为的减少，这两个指标可信度较高，易于观察，重现性较好，在抑郁动物模型中得到广泛的使用［10］。通过观察这两个指标，确认模型建立成功，并采用经典的抑郁症**筛选行为学实验用于评价补阴消郁汤对小鼠更年期抑郁模型的**作用。

本研究选用其配方颗粒，配方颗粒具有质量稳定，便于调配，服用方便等诸多优点。本研究结果表明补阴消郁汤能明显改善抑郁模型小鼠的行为，表现为增加小鼠在旷场装置中心区域的站立次数，增加糖水消耗量，明显较少强迫游泳和悬尾的不动时间。上述结果从行为学角度证明了补阴消郁汤能有效的改善小鼠更年期抑郁样行为。

抑郁症的发病机制目前认为主要是单胺类神经递质失调，而多巴胺和5-HT 失调是抑郁发生的经典假说。有研究证明，与正常人相比，抑郁症患者额叶内5-HT 受体功能下降，提高单胺类神经递质水平能改善抑郁水平［11］。更年期患者体内雌**下降，而雌**的降低影响脑部，5-HT 等神经递质的含量［12］，本实验研究结果显示，卵巢切除模型小鼠前额叶皮层及海马内多巴胺和5-HT 水平均明显降低，与文献报道相符，而补阴消郁汤能有效提高抑郁模型小鼠前额叶皮层及海马内多巴胺和5-HT 水平，结果说明补阴消郁汤改善抑郁作用与调节单胺类神经递质水平有关。

也有研究发现，抑郁发展过程中可见GABA 能和Glu 能突触相关蛋白变化，神经递质水平失调，从而影响神经兴奋性。同时，GABA 和Glu 的含量和比例与学习记忆相关［13］，在下一步的研究中，拟进行补阴消郁汤配方颗粒对小鼠氨基酸类神经递质，如GABA 和Glu 的含量变化影响，进一步考察补阴消郁汤的作用机制。

综上所述，补阴消郁汤配方颗粒预防给药可以改善更年期模型小鼠的抑郁行为，其机制可能与调节小鼠脑内单胺类神经递质的含量有关。