大小鼠条件恐惧实验方法
（Fear Conditions test）
一.实验原理
条件性恐惧实验系统（场景恐惧系统）用于小型啮齿类动物（大、小鼠）环境相关条件性恐惧实验研究。啮齿类动物在恐惧时会表现出特有的不动状态（Freezing），动物在这种情况下倾向于保持静止不动的防御姿势。抗抑郁药和抗**兴奋药可以明显缩短不动状态持续的时间。
实验过程中，实验对象被给与一个声音信号（条件刺激），随后给予电击（非条件）刺激。该训练称为条件性训练，训练结束后实验动物进行声音信号或环境联系性实验。一般情况下啮齿类动物对相应的环境和不同环境下同样的声音信号都会做出明显的条件性恐惧反应，如僵直静止不动。这种测试可以在训练结束后立刻或几天后进行可以提供在条件信号影响下短期和长期记忆的信息。
二.实验装置
恐惧箱材质采用无味的ABS塑料材质或者医用有机板，颜色为黑色或者灰色。亚搏APP·官方网站（中国）v2.78IOS下载/Android通用版/手机APP生产的恐惧系统包括一个30cm*30cm，底部可通电的实验箱、一个直径为5cm/10cm 的平台、隔音箱（内附吸音棉）以及SuperFcs条件恐惧视频分析软件，通常平台高度与直径一样，尺寸可定制。实验箱上方安装录像监控器（视频盒），以录制动物在实验箱中的活动情况，以供日后分析使用。
三.实验方法
A方案
1. 在实验前一个星期，每天抚摸实验动物1-5min，连续7天，（这个时间段需要实验员根据实际情况来定制）借以消除实验动物对实验者的恐惧。
2. 训练期：训练时将动物放入恐惧箱内适应3min，然后给予声光刺激（持续30s，70db，3000Hz）和底部**通交流电（持续2s，0.5mA），结束后停留30s，将动物再放回饲养笼。
3. 测试期：将动物重新放回实验箱，不给予任何刺激，记录动物5min内僵直反应时间（除呼吸运动外无其他任何行为活动的状态）。测试后2h，进行改变环境（实验箱放入分隔板、侧壁换成斑马纹板或者壁上贴上其他形状物体）的条件性（无声音180s；声音180s，70db，3000Hz）恐惧测试。每次实验结束后，用酒精檫拭场地，避免气味干扰。
B方案
将大鼠放在动物饲养室内适应一周。饲养室内温度为24±0.5℃，湿度为60%，光：暗周期为12h：12h（光照时间为8：00-20：00），随机分笼单独饲养，自由进食、饮水。
（1）条件性恐惧的建立：将大鼠分别放入斯金纳箱（箱子底部为铜条栅栏，可通电）内,适应2分钟后再给予单一频率声音信号(4.5KHZ,60dB,30S，该声音由美国Adobe公司的Adobe Audition2.0软件制作)适应4次（两次声音间隔1-4分钟）,然后再给予6次以声音信号为提示的不可逃避足底电击(1mA,5s)，声音与电击同时结束，两次声音间隔为1-4分钟，共28分钟。动物在被电击时发生惊叫、惊跳、逃避等,听到声音提示时出现慌张、逃避或者僵立行为（除呼吸外无其他运动行为），这样建成恐惧动物模型（以下简称建模）。实验结束后让动物在斯金纳箱内继续停留2分钟后放回饲养笼饲养。每次实验结束后用90%酒精擦拭箱底，用湿布擦拭箱壁，以避免残留气味对后续实验大鼠的影响。
（2）恐惧消退训练：24h后将已经建立条件性恐惧的动物再次放入斯金纳箱内，仅给予声音信号16次，两次声音间隔为1-2分钟，共24分钟。恐惧对照组在对应的时间点放进斯金纳箱内24分钟，不进行消退训练（不给声音刺激）。 (3)条件性恐惧消退保持测试：恐惧对照组和恐惧消退组（注：此时大鼠分为两组：恐惧消退组和对照组）分别在恐惧消退训练后的第1、3、7天将大鼠放在训练箱内，给予5次声音信号，时间间隔为0.5s，记录3分钟内的不僵立时间，计算3分钟内不僵立时间百分比，作为消退保持成绩。百分比越高，表明消退保持成绩越好。
<备注>：实验方法摘录相关文献，仅供参考使用。
四.实验数据
主要应用的实验数据：
1.Freezing次数，动物在实验箱中前后一共出现的僵直次数
2.Freezing时间，实验开始后动物一共出现僵直行为的总时间
这2个指标作为评价动物恐惧记忆的重要指标，通常这两个指标高度相关。
五.注意事项
1. 实验前一周每天抚摸大鼠可以明显减少大鼠对实验者的恐惧感以及无关刺激对实验箱中动物的影响。
2. 尽管还没有证据证实在**中不同时间对于实验结果是否有明显的影响。但是结合实验的数据建议实验动物检测时间*好在上午9:00至下午15:00之间进行，如果有条件，且需要重复多次检测，尽量在每天同一时间段检测，以减少数据的波动。
3. 每次实验结束后，用酒精檫拭场地，避免气味干扰。
4. 动物的回避性反应差异较大，因此需要检测大量的动物。如需减少差异或少用动物，可对动物进行预选或按学习成绩好坏分档次进行试验。
5. 电流刺激大小需要根据每批次动物的应激情况来调节，通常小鼠刺激大小为0.2-0.5ma，大鼠为0.6-0.9ma左右。
6. 隔音箱的作用是*大限度的降低外界噪音、光线以及人为因素对实验本身的干扰，隔音箱属于选配组件，情况允许下建议配置。
