【摘要】 目的 通过观察蒙医温针对**模型大鼠自主活动的影响及对****钠致睡眠时间的影响,探讨蒙医温针的改善睡眠作用。方法 ①选用****钠诱导睡眠的法,取健康雄性 SD 大鼠 30 只,分为空白对照组和蒙医温针组,每组 15只,以****钠致眠时间为观察指标。②采用对氯苯丙氨酸致**大鼠模型,取健康雄性 SD 大鼠 60 只,分为空白对照组、**模型组、蒙医温针组和***注射液组,每组 15 只,观察大鼠的自主活动和一般情况。结果 蒙医温针组****钠致眠大鼠睡眠潜伏期与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。蒙医温针组****钠致眠大鼠睡眠时间与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)。**模型组、蒙医温针组和***注射液组大鼠造模前体重较空白对照组减轻(均 P＜0.01)。**模型组大鼠**后体重与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.01)。蒙医温针组和***注射液组大鼠体重增加,与空白对照组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.01)。**模型组大鼠活动时间明显高于空白对照组(P＜0.01)。蒙医温针组和***注射液组大鼠活动时间明显低于**模型组(均 P＜0.05)。**模型组大鼠站立次数明显高于空白对照组(P＜0.05),蒙医温针组和***组大鼠站立次数明显低于**模型组(P＜0.05,P＜0.01)。结论 蒙医温针对大鼠有**作用和改善睡眠功能作用。
【关键词】 针灸疗法;蒙医;睡眠;自主活动;大鼠;**模型
**是睡眠的发生或维持障碍,影响日常生活的一类病症,属蒙医“赫依”病范畴。西医**本病仍存在难以根治、不同程度地产生**反应、耐药性和依赖性等问题。通过文献记载和近年来的临床观察发现,蒙医温针对**症的疗效显著,同时具有无毒副反应、**可靠等特点,其*大优势在于可以避免口服**所致的副反应。因此,寻找适当有效的针刺干预措施是临床与实验研究的重要课题之一。本实验采用****钠诱导大鼠睡眠的方法,观察蒙医温针对 SD 大鼠睡眠的影响,并选用对氯苯丙氨酸致**大鼠模型,采用旷场试验(OFT 试验),观察**大鼠的自主活动和一般情况,探讨蒙医温针改善睡眠的作用,现报告如下。蒙医温针对大鼠睡眠时间和自主活动的影响
 
1 材料与方法
1.1 实验动物
健康雄性SPF级SD大鼠80只,体重(180±220)g,由中国人民解放军**医学科学院实验动物中心提供[许可证号 SCXK-(军)2007-004]。
1.2 主要仪器与试剂
电子天平(BS124S,赛多利斯提供);MLY-Ⅰ型蒙医疗术温针仪(内蒙古医学院蒙医药学院研制,**号ZL201120058078.0);特制蒙医银针(0.5 mm×30 mm,内蒙古元阳中蒙医科技开发有限责任公司提供);自发活动视频分析系统(亚搏APP·官方网站（中国）v2.78IOS下载/Android通用版/手机APP提供);****钠、对氯苯丙氨酸由 sigma 提供;***注射液(2 mL:10 mg)由西安利君沙制药有限责任公司提供(国药准字 H61022214)。
2 方法
2.1 蒙医温针对****钠致眠大鼠睡眠时间的影响
2.1.1 实验分组及处理方法
取大鼠 30 只,随机分为空白对照组和蒙医温针组,每组 15 只。随机分组标号后,在室温 18℃～28℃、相对湿度 40%～50%的条件下饲养。蒙医温针组根据蒙医经典理论和临床**有效穴取顶会穴、赫依穴、心穴,每次取 1 个穴位。顶会穴位于两眉正中线与两耳叶上缘连线在头顶上的交叉处;赫依穴位于第 1 胸椎上凹正中;心穴位于第 7 胸椎下凹正中。将大鼠固定后,用特制银针斜刺,再接蒙医疗术温针仪,电流强度为 100 mA,温度为 40℃,留针 15 min。每日上午 8:00-11:00 进行**,共** 7 d。空白对照组每日同蒙医温针组相同方法固定 1 次,每次 15 min,连续 7 d。蒙医温针对大鼠睡眠时间和自主活动的影响
2.1.2 观察指标
两组**结束后给予腹腔注射****钠(45 mg/kg),观察两组大鼠翻正反射消失和恢复时间,以翻正反射消失至恢复的时间为睡眠持续时间,开始记录给药时间、翻正反射消失时间和翻正反射恢复时间,睡眠以翻正反射消失为指标。分别计算出睡眠潜伏期和睡眠持续时间。记录大鼠腹腔注射****钠后至翻正反射消失时间为睡眠潜伏期,翻正反射消失至大鼠觉醒的时间为睡眠持续时间。
2.2 蒙医温针对**模型大鼠自主活动的影响
2.2.1 造模方法
将 PCPA(300 mg/kg)用弱碱性生理盐水(pH 值为7～8)配置成混悬液备用。**模型组、蒙医温针**组和***注射液组大鼠在实验前 2 d 每日早晨 8:00开始,按1 mL/100 g 用量腹腔注射 PCPA 混悬液,每日1次,连续注射 2 d。第 1 次腹腔注射PCPA 混悬液 28～30 h 后,大鼠出现昼夜节律消失,活动明显频繁,白天也活动不停,兴奋性增高,攻击性增强,饮食及二便显著增多,鼠毛蓬乱无光泽,大便色灰白,整体观察与对照组明显不同,表明**模型成功。
2.2.2 实验分组及处理方法
取正常雄性 SD 大鼠 60 只,随机分为空白对照组、**模型组、蒙医温针**组和***注射组,每组 15 只,正常饲养 7 d 后予以相应处理。①空白对照组不造模,于实验前连续 2 d 腹腔注射同 PCPA 用量体积的弱碱性生理盐水,第 3 天开始实验,与蒙医温针组同样方法固定 15 min,连续 7 d,其他处理同蒙医温针组。②**模型组造模 2 d,第 3 天开始实验,与蒙医温针组同样方法固定 15 min,连续 7 d,其他处理同蒙
医温针组。③蒙医温针组造模 2 d,第 3 天开始蒙医温针**,连续 7 d,针刺方法同实验 1。④***注射液组实验前2 d造模,第3天开始大鼠腹腔注射***注射液,0.92 mg/kg/d,每日 1 次,连续 7 d。
2.2.3 旷场试验
参照文献方法采用旷场试验方法,于**第7天(第 1 次腹腔注射 PCPA 后 7 d),在安静、暗光条件下检测。实验前先置大鼠 1 次单独放入 OFT-100 自发活动实验仪(箱子长宽均为 80 cm,高为 40 cm,为内空的立柱体,壁周为透明玻璃)中适应3 min后,操作者握住大鼠尾根部 1/3 处,轻轻将大鼠放入矿场箱中格内,开始同步录像计时。观察 5 min 内大鼠活动情况。取出大鼠后,用毛巾蘸清水及低浓度酒精彻底擦拭箱底,避免留有气味而干扰下 1 只大鼠的观察结果。
2.3 观察指标
①中央格停留时间(s),即自大鼠被放入正中格至其有 3 爪跨离该格的时间;②站立次数,即两前肢向上抬起离开箱底面或攀伏在侧壁上,以后腿支撑使身体竖立的次数;③水平活动时间(s),即水平面上活动的时间。蒙医温针对大鼠睡眠时间和自主活动的影响
2.4 统计学方法
所有数据采用 SPSS16.0 软件统计处理,采用两个独立样本的 t 检验和卡方检验,计量资料以均数±标准差表示,以 P＜0.05 表示差异统计学意义。
3 结果
3.1 蒙医温针对****钠致眠大鼠睡眠时间的影响
由表 1 可见,蒙医温针组****钠致眠大鼠睡眠潜伏期与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞·474· Shanghai JAcu-mox, May 2014, Vol 33, No 50.05)。蒙医温针组****钠致眠大鼠睡眠时间与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.01),提示蒙医温针明显延长****钠诱导的睡眠时间。
3.2 蒙医温针对**模型大鼠自主活动的影响
空白对照组大鼠睡眠、饮食等方面无明显改变。**模型组、蒙医温针组及***注射液组大鼠于第 1 次腹腔注射 PCPA 混悬液 28～30 h 后,昼夜节律消失,白天活动增多,饮水进食减少;随**时间的延长,大鼠疲惫、烦躁、皮毛蓬乱无泽愈加明显,对声音、光等刺激的警觉性减弱,饮食及二便增多,攻击性增强。整体观察与对照组明显不同,与文献报道一致,表明模型复制成功。至造模第 8 天,即实验当天**模型组大鼠仍存在上述行为改变。蒙医温针组和***组大鼠在予以针刺刺激和***注射后,表现为安静、活动减少等现象,睡眠时间、饮水进食、精神状态等均逐渐恢复。
3.2.1 4 组大鼠不同时间点体重比较
入组时各组大鼠体重无明显差异(P=0.202,F=1.595)。造模前,各组大鼠体重无明显差异(P=0.701,F=0.474)。各组大鼠**前体重间有显著性差异(P=0.000,F=11.156),**模型组、蒙医温针组和***注射液组较空白对照组减轻(均 P＜0.01)。**后,**模型组大鼠体重与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.01)。蒙医温针组和***注射液组大鼠体重增加,与空白对照组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.01);蒙医温针组和***注射液组大鼠体重与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。
3.2.2 4 组大鼠旷场实验水平活动和垂直活动参数比较
由表 3 可见,在水平活动上,**模型组大鼠活动时间明显高于空白对照组大鼠(P＜0.01),**模型组大鼠在中央格停留时间有增高的趋势,但与空白对照组大鼠比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。蒙医温针组和***注射液组大鼠活动时间明显低于**模型组大鼠(均 P＜0.05)。在垂直活动上,**模型组大鼠站立次数明显高于空白对照组大鼠(P＜0.05),蒙医温针组和***组大鼠站立次数明显低于**模型组大
鼠(P＜0.05,P＜0.01)。
4 讨论
**症属蒙医“身、心、语”功能紊乱而引起人体“三根”平衡失调而导致的“赫依”病。**的关键在于调节“三根”平衡,疏通筋脉,促使机体归于“三根七素”相对平衡状态,恢复正常生理功能。蒙医温针是集针刺效应、温热效应以及穴位特异性刺激为一体,通过抑制“赫依”,平衡“三根”的作用达到****的目的。顶会穴、赫依穴、心穴是临床用于****症的主要穴位。顶会穴具有**、调神之功效,对**“赫依”性喑哑、神志不清、癫狂、视力减退、头晕、**等起主要作用;赫依穴对**癫狂、心悸、激荡、娅结、夜不能寐、舌苔灰白、颈项强直等赫依性**起主要作用;心穴位对**心悸、心抖、癫狂、巴达干赫依性心病、**、谵妄、纳呆、神志昏迷等起主要
作用。蒙医温针疗法是一种行之有效的****的方法。本实验中用到的蒙医温针仪是结合现代电子技术研制而成,可以达到传统蒙医温针的作用,且具有操作简便、温度可调,**等特点。睡眠时间是评测睡眠质量的重要指标。****钠为一种**神经抑制药,低剂量时主要抑制脑干网状上行激活系统,大剂量则对**神经系统起广泛抑制,从而出现**、催眠、麻醉作用,故在一定阈剂量下可致大鼠睡眠。因此选用****钠诱导大鼠睡眠是被广泛采用的**催眠实验基础指标。在于观察蒙医温针与****钠的协同作用。以往文献对****钠剂量的报道不一,且大鼠自身对****钠的敏感性也存在差异。因此,前期实验先对****钠的阈剂量进行了摸索,结果致大鼠全部睡眠的****钠阈剂量值为 45 mg/kg。本实验结果显示,蒙医温针与****钠有协同作用,可延长****钠诱导大鼠睡眠的时间(P＜0.01),提示蒙医温针具有**催眠的作用。行为是机体的重要功能表现之一,动物的行为是在神经、***系统和运动器官的共同协调作用下形成的,其中以神经调节为主。对行为学进行评估时神经、***等研究领域的重要组成部分。目前行为学评价方法有很多种,如观测大鼠的一般情况、探究行为、情绪反应、体力情况等。本实验采用旷场实验来评价**大鼠模型的行为学变化。旷场实验是评价实验动物在新异环境中自主行为、探究行为与紧张度的一种方法。本实验在**模型大鼠造模过程中,从大鼠一般行为观察发现,**后的大鼠饮食、能量消耗增加,体重下降。大鼠表现倦怠、体毛蓬乱、无光泽。在行为上,长时间**后的大鼠兴奋性提高,探究行为和攻击性增强,对环境刺激的警觉性和攻击性行为增加。至实验当天时(**次腹腔注射 PCPA 后 7 d),**模型组大鼠仍存在上述行为异常。蒙医温针组和***注射液组大鼠在予以针刺刺激和***注射后,睡眠时间、精神状态、饮水进食、体重等均逐渐恢复。旷场实验的参数一般有水平运动参数、垂直运动参数和中央格停留时间。水平运动参数有跑动的距离、速度、时间等,这些参数反映动物的活动度;垂直活动指的是动物的站立、攀壁、修饰等行为,反映动物对新鲜环境的好奇程度。在旷场实验中大鼠增加在中央格停留时间,减少外周格时间,显示更少的焦虑样行
为。本实验结果显示,**模型组大鼠在旷场中央格停留时间高于空白对照组,显示出**模型组比空白对照组减少了焦虑样行为;**模型组大鼠活动时间和站立次数明显高于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05),显示模型组的探索性行为增强。蒙医温针组大鼠在旷场实验中活动时间及站立次数均明显低于**模型组(P＜0.01,P＜0.05),旷场中央格停留时间也比模型组低,表明蒙医温针能够改善**所致大鼠焦虑样行为减少和探索行为和探索行为增强的异常变化。通过实验研究发现,蒙医温针改善**的时间、一般情况和行为学改变的作用和***注射液的作用无差别,表明蒙医温针同***注射液一样,可以改善**大鼠的行为、情绪变化,缓解大鼠的紧张程度,有**催眠的效果。
**导致的烦躁、倦怠等异常行为和情绪变化不仅影响到人的生活质量,更会影响人的认知、记忆能力。蒙医温针能延长**时间的同时有效调节**模型大鼠精神情绪行为的异常,提示蒙医温针具有改善睡眠、**、**的作用,而其**机制还有待进一步研究。