摘 要 : 目的 探讨T迷宫实验对焦虑模型小鼠行为的影响。方法 采用逐日递增法 , 皮下注射啡形成小鼠依赖后 , 给予纳络酮催促 , 建立啡戒断后焦虑模型。采用“三阴交”电针**和 T 迷宫行为学测试的方法 , 观察针刺对啡戒断后焦虑小鼠的焦虑情绪和脑内去甲肾上腺素 ( N E) 含量变化的影响。 结果 1.针刺可使戒断后焦虑模型小鼠在闭臂滞留时间缩短 ( P < 0.05) , 在开臂滞留时间延长 ( P < 0.05) ; 2.针刺能明显降低模型组小鼠脑组织 N E ( P <0.01) 含量。 结论 针刺可抑制啡戒断后所致的焦虑症状 , 其抗焦虑效应可能与针刺调节焦虑模型小鼠脑内 N E 的释放有关。
关键词 :针刺疗法 ; 啡戒断 ; 焦虑 ; 去甲肾上腺素 ; T迷宫
焦虑是对**类物质 ( 如***等) 依赖的患者所反映的重要戒断症状和稽延性症状 , 患者复吸和觅药行为与焦虑呈正相关。临床研究已经证明 ,针刺不仅有较好的脱毒**效果 ,而且对啡戒断后的焦虑也有良好的改善作用。但是 ,对于针刺的这一作用机理 , 目前却未见研究报告发表。为认识针剌对啡戒断后焦虑作用的机理 , 本实验采用 T - 迷宫焦虑模型 , 观察了针刺对小鼠啡依赖模型戒断后焦虑症状的调整及脑内 N E 的影响 ,并对针刺抗啡戒断后焦虑的神经生物学机制 ,进行了初步探讨。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 动物选用昆明种小鼠 50 只 , 雄性 , 体重 18 g ± 1.2g 。( 动物及饲料均由成都中医药大学实验动物中心提供) 。动物在实验前驯养 1 周 , 动物房温度、湿度分别维持在 20 ℃、 70 %左右。
1.1.2 药品和试剂
盐酸啡注射液 ( morp hine hydrochloride) 由沈阳**制药厂提供 ,批号 930503 。盐酸纳络酮注射液 ( naloxone ,NL X ) ,由益桥 ( 湖南) 制药有限公司提供 , 批号 950920 。N E 标准品 :Sigma Chemical Co 。
1.1.3 仪器与设备
T - 迷宫 , 参照文献制作 ，由亚搏APP·官方网站（中国）v2.78IOS下载/Android通用版/手机APP提供; 荧光分光光度计( RF - 510 型 ,日本岛津) ; 韩氏电针**仪。T迷宫实验对焦虑模型小鼠行为的影响
1.2 方法
1.2.1 小鼠啡依赖模型的建立
小鼠按照随机分组的原则 ,分为完全空白组 ( 简称空白组) ; 迷宫空白组 ( 简称迷空组) ; 模型组 ; 模型加电针组 ( 简称模针组) ; 单纯电针组 ( 简称单针组) 。每组 10 只。
A. 空白组 : 除每天在相同的时间进行与其他组相同的方法固定外 ,不做任何处理。
B. 迷空组 : 每天除进行和空白组相同的处理外 ,再加迷宫实验。
C. 模型组 : 造模方法参照文献进行 : 以小鼠热板法镇痛 ED50 ,即啡 2.95mg/ kg 为基础 ,按照逐日递增原则进行。于第 12 次给药后 3h , 腹腔注射纳络酮 20mg/ kg 后 ,立即将小鼠置于 3000 mL 烧杯内 ,观察注射纳络酮 10 min 内小鼠的跳跃反应。通过小鼠跳跃实验被确认为**成瘾者 , 再接受迷宫试验 ,符合焦虑标准者即为啡戒断焦虑模型成功。随后 6 天只进行与针刺组相同的固定和迷宫实验。
D. 模针组 : 在啡戒断后焦虑模型基础上 , 进行电针** ; 电针从催瘾后当天开始进行。取三阴交穴。穴位根据《中国兽医针灸学》及《实验针灸学》并结合人体进行参照定位。取穴定位之后 , 以掀针刺于双侧三阴交 , 接韩氏电针**仪 , 频率 2 ～100HZ ,电流 0.5～2 mA ,电压 2～4 V ,以见到小鼠下肢轻微抖动为度。每日** 1 次 , 每次** 15 min 。连续** 6 天 ,并参予迷宫实验。
E. 单针组 : 不造模 , 只给予同模针组相同的固定、针刺处理和迷宫实验。各组动物在第 6 天迷宫实验后 ,立即断头处死 ,迅速取脑 , 置于 - 30 ℃冰箱冷冻待测。用荧光法检测 N E 的含量。
1.2.2 T - 迷宫实验
具体方法为 : 实验前将每只小鼠放入一个 60 ×60 × 35cm 宫体中 , 让其熟悉环境 5 min 后 , 先置于迷宫的闭臂封闭端 ,头朝壁 ,观察者距离迷宫中心1 m 。记录实验期 ( 3 min) 内小鼠在闭臂滞留时间(以四肢全部出臂为准) , 闭臂共测试 3 次。再将小鼠置于开臂的顶端 , 记录实验期 ( 3min) 内小鼠在开臂滞留的时间 ( 以四肢全部出臂为准) , 开臂测试 1次。其中 ,在每次测试结束后 ,均将小鼠放回塑料盒停留 30 s 后再进行下一次测试。若 3 min 结束 , 小鼠仍在闭臂和开臂滞留 , 则将小鼠取出 , 计为 3min 。
测试时间为 : 注射纳络酮催瘾后当天 ( 电针前) ,**第 3 天和**结束时 , 共进行 3 次迷宫行为学测试。实验在安静环境下进行。
1.2.3 实验数据统计方法
实验结果数据以均数 ±标准差 ( … x ± s) 表示 , 采用 SPSS 10.0 统计软件包进行单因素方差分析、 q检验 ( Newman - Keuls 法) 。
2 结果
2.1 电针对啡戒断后焦虑小鼠行为学影响
从表 1 得知 , 纳络酮催瘾后 , 模型组和模针组小鼠在第 3 次测试时其闭臂滞留时间长于迷空组和单针组 ( P < 0.05) , 表明焦虑模型成功 , 接受造模的模型组和模针组小鼠之差异 , 无统计学意义 ( P <0.05) , 具有良好的可比性。由表 2 可知 , 接受**3 天后 , 模针组小鼠在第 3 次闭臂滞留时间短于模
型组 ( P < 0.05 ) , 在开臂的时间长于模型组 ( P <0.05) 。单针组与迷空组相比 , 也获得同样结果 ( P< 0.05) , 提示针刺具有抗焦虑的**效应。从表 3得知 , 在接受** 6 天后 , 模针组小鼠在闭臂滞留时间短于模型组 ( P < 0.01 ) , 在开臂的时间长于模型组 ( P < 0.01) 。单针组和迷空组相比均比模型组小
鼠在闭臂滞留时间短 ( P < 0.01 , P < 0.05 ) ; 提示针刺抗焦虑的**效应 , 随着**时间的增加而继续维持。
2.2 针刺对啡戒断后焦虑小鼠脑组织 N E 含量的影响。
由表 4 可知 , 模型组小鼠脑内 N E 含量高于空白组、模针组、单针组 ( P < 0.01 ) 和迷空组 ( P <0.05) ,模针组小鼠脑内 N E 含量低于模型组 ( P <0.01) , 并接近于空白组 ( P > 0.05) 。 迷空组小鼠脑内的 N E 含量高于空白组、单针组和模针组 ( P <0.05) 。
3 讨论
近年来 , 在高架十字迷宫模型基础上发展起来的新型 T - 迷宫焦虑模型 , 为国际公认和常用的一种小鼠焦虑模型。T - 迷宫小鼠模型 , 它以动物自发行为为基础 ,动物不需要特殊训练 ,利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧心理 , 形成动物的矛盾行为 , 以动物滞留开臂和闭臂的时间长短来反应动物的焦虑状态 , 具有与临床更为接近的优势。本实验以逐日递增法形成吗依赖小鼠模型 ,腹腔注射纳络酮催促戒断后 ,采用 T - 迷宫筛选焦虑模型小鼠。迷宫实验结果表明 , 啡戒断后小鼠滞留在闭臂的时间长于单针组与迷空组 ( P <0.05) , 说明戒断后小鼠已呈现出焦虑状态 , 提示本实验造模成功。
在本实验中 , 观察到模型组小鼠在迷宫闭臂滞留时间长于模针组小鼠 , 在开臂滞留时间则短于模针组小鼠 ( P < 0.01 ) , 说明电针具有抗啡戒断后焦虑的**效应。
刘东亮等认为 , 吸食毒浊之气 , 先为吸而犯肺 ,食而入胃 ,后则郁闭心脑 ,伤及脾、肝、肾、三焦及肠 ,致使五脏闭结 , 毒聚脏腑。杨氏则认为 , 长期吸毒会导致阴液亏损 ,元气暗耗 ,气血虚衰 ,脏腑俱损 ,一旦断烟 , 则诸症皆起。总之 , 若肝、脾、肾阴液不足 ,气血衰少 ,脑髓失去濡养 ,导致心神不定 ,心失濡养 ,而发生焦虑。三阴交穴首载于《针灸甲乙经》 ,为足太阴脾经之穴 , 于足太阴、足厥阴、足少阴三阴经交会之处 ,具有调肝补脾滋肾之功 ,本实验结果表明 ,三阴交穴具有抗啡戒断后焦虑的**效应。
目前学术界已公认 : 啡、***戒断后焦虑情绪的产生 ,与**多种神经系统功能异常变化有关。其中 : **去甲肾上腺能神经元主要接受边缘系统蓝斑区 N E 核的支配 , 使突触后受体包括α 1 、 α 2 、 β 1 、β 2 肾上腺受体释放 N E ,以及蓝斑核的原癌基因 c -fos 表达明显增加 , 从而诱发啡戒断后焦虑的产生。此外 ,N E 系统参予**戒断后的焦虑情绪的机制 ,还可能通过与多巴胺 ( DA) 和 5 - 羟色胺 ( 5 -HT) 等系统互相调节作用而实现。在本实验中 , 模型组小鼠脑组织 N E 含量高于其余各组 , 其行为学表现为焦虑状态 , 提示 N E 可能直接参与焦虑状态的产生。模针组小鼠脑内 N E 水平低于模型组 , 并接近正常组小鼠 , 说明针刺不仅能够对啡戒断后焦虑 ,从行为学方面产生**效应 ,而且还可能影响** N E 含量 ,降低** N E 神经元的兴奋性 ,抑制其兴奋传导过程 , 从而呈现抗焦虑效应。但这一作用机理与其他神经递质之间的关联如何 , 还有待于进一步研究。
